PCR und Real-Time PCR - Molekularbiologische Methoden in der Lebensmittelanalytik - page 46

Bei der Interpretation der Ergebnisse ist zunächst zu überprüfen, ob die Kontrol-
len korrekt ausfallen und keine Kreuzkontaminationen, Inhibitionen etc. vorliegen.
Ein positives Ergebnis einer PCR muss immer noch bestätigt werden (Restriktions-
verdau, Hybridisierung, Sequenzierung), der alleinige Vergleich der Größe des Am-
plifikates genügt nicht. Die Verwendung einer Real Time-PCR-Sonde gilt bereits
als Bestätigung des PCR-Produktes.

4.7 PCR-basierte Typisierungstechniken

In der Lebensmittelanalytik genügt häufig für ein Screening der qualitative Erreger-
nachweis. In besonderen Fällen will man aber auch epidemiologische Fragestel-
lungen untersuchen und Infektionsketten bzw. Kreuzkontaminationen aufklären.
Gängige Verfahren sind die Pulsfeldgelelektrophorese (PFGE), sequenzbasierte
Methoden wie z. B. Multi Locus Sequence Typing (MLST) oder Fragmentlängen-
analyse (RFLP, Ribotyping). Bei der RFLP wird das gesamte Genom mit einem
Restriktionsenzym verdaut und elektrophoretisch aufgetrennt. Um die Komplexität
der erhaltenen Muster zu reduzieren, geht häufig eine PCR-Amplifikation voraus.
Beim PCR-Ribotyping werden z. B. gezielt die ribosomalen Gene amplifiziert. Eine
andere Möglichkeit ist die Amplifikation von Bereichen mit repetetiven Sequenzen,
auch als rep-PCR bezeichnet. Für Enterobacteriaceaen wurde die ERIC-PCR (Ent-
erobacterial Repetitive Intergenic Consensus PCR) etabliert.

4.8 Schlussfolgerung

PCR und Real Time PCR-Techniken stellen ein vielfältiges Werkzeug zur Detek-
tion und Charakterisierung von Mikroorganismen, Allergenen oder gentechnischen
Veränderungen in Lebensmitteln dar. Diese außerordentlich sensitiven Methoden
sollten allerdings nur durch geschultes und erfahrenes Personal unter Beachtung der
Maßnahmen zur Qualitätssicherung durchgeführt werden, um falsch-positive oder
-negative Resultate zu vermeiden.

Literatur

[1] Lottspeich, F, Engels, JW (Hrsg.) (2006) Bioanalytik, 2. Aufl. Spektrum Akademischer Ver-
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[2] Viljoen, GJ, Nel, LH, Crowther (2005) JR Molecular Diagnostic PCR Handbook, Springer
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[3] Saiki, RK, Gelfand, DH, Stoffel, S, Scharf, SJ, Higuchi, R, Horn, GT, Mullis, KB, Erlich, HA
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