PCR und Real-Time PCR - Molekularbiologische Methoden in der Lebensmittelanalytik - page 35

Kapitel 4
PCR und Real-Time PCR

Regina Konrad und Ulrich Busch

Inhalt

4.1 Einführung ....................................................................................................................... 35

4.2 PCR-Reaktion und Komponenten .................................................................................... 36

4.2.1 PCR ...................................................................................................................... 36

4.2.2 Real-Time PCR .................................................................................................... 37

4.2.3 Fluoreszenzfarbstoffe in der Real-Time PCR ...................................................... 39

4.2.4 Modifikationen von Sonden ................................................................................. 40

4.3 Qualitativer und quantitativer Nachweis ......................................................................... 40

4.4 Optimierung und Validierung ........................................................................................... 43

4.5 Bestätigungsreaktionen .................................................................................................... 43

4.6 Qualitätssicherung im PCR-Labor und Kontrollen .......................................................... 44

4.7 PCR-basierte Typisierungstechniken ............................................................................... 46

4.8 Schlussfolgerung .............................................................................................................. 46

Literatur ..................................................................................................................................... 46

4.1 Einführung

Die vielfältigen Anwendungsmöglichkeiten der Polymerasekettenreaktion (poly-
merase chain reaction, PCR) machen sie zu einer der wichtigsten und am häufigsten
eingesetzten Methoden in der molekularbiologischen Forschung und Diagnostik.
Für diese Technologie wurde der Erfinder der Methode, Kary Mullis, 1993 mit dem
Nobelpreis ausgezeichnet. Die PCR erlaubt einen hochsensitiven und spezifischen
in-vitro -Nachweis von Desoxyribonukleinsäuren (DNA), da im Zuge der Reaktion
Sequenzabschnitte gezielt vermehrt werden. Innerhalb weniger Stunden können aus
einem einzigen Zielmolekül 10 12 identische Moleküle entstehen [ 1 ].