Molekularbiologische Speziesdifferenzierung - Molekularbiologische Methoden in der Lebensmittelanalytik - page 135

Abb. 9.5 Elektropherogramm der Sequenzierung mit dem Primer L14735 zur Speziesbestim-
mung bei Fischen
zierung erfolgt über Restriktionsendonukleasen. Männliche Tiere besitzen zwei
Allele des Zielgens, wohingegen weibliche Tiere nur das X-chromosomale Allel
aufweisen.
Die geschlechtsspezifischen Allele des ZFX/ZFY-Gens werden mit einem uni-
versell hybridisierenden Primer-Paar amplifiziert. Geschlechtsspezifische Unter-
schiede werden durch Restriktionsenzyme dargestellt. So weist das männliche Rind
im ZFY-Gen eine Pst I-Schnittstelle auf, weibliche Rinder besitzen diese Schnitt-
stelle nicht. Dies resultiert bei männlichen Rindern in zwei Fragmenten des ZFY-
Allels, weiterhin ist auf dem Agarosegel das ungeschnittene X-chromosomale Allel
sichtbar. Weibliche Rinder hingegen weisen nur letzteres auf.
Bei Schaf und Ziege wird das ZFY-Gen der Böcke durch das Enzym Cac I nicht
geschnitten, wohingegen das ZFX-Gen in zwei Fragmente mit 272 und 173 geteilt
wird.