Pathogene Mikroorganismen - Molekularbiologische Methoden in der Lebensmittelanalytik - page 103

Abb. 7.3 Ergebnisse
zweier Ringversuche (Kit 1:
Qualitativer Nachweis von
Yersinia enterocolitica ; Kit
2: Semi-quantitativer Nach-
weis von vier unterschied-
lichen Konzentrationen eines
Plasmids, welches ein L.
monocytogenes -spezifischer
Target insertiert hatte, Anga-
ben in Prozent der erwart-
baren richtigen Ergebnisse;
aus [40])

100

90

80

70

60

50

40

30

20

10

0

Kit 1 Kit 2

weder am 3′- noch am 5′-Ende analytische Folgen haben [ 37 ]. Auch dieser Be-
fund macht bei Ringversuchsabweichungen den Faktor Mensch als entscheidende
Einflussgröße wahrscheinlich. Um den molekularbiologischen Methoden auch als
Bestätigungsmethoden zum Durchbruch zu verhelfen, ist daher eine einfache Hand-
habung von weitestgehend standardisierten Testverfahren notwendig. Dies gilt vor
allem dann, wenn die Laborausstattungen und die Trainingskapazitäten des Labor-
personals eingeschränkt gegeben sind [ 16 ]. Bestätigungsmethoden sind molekular-
biologische Verfahren schon heute, wenn kulturelle Referenzverfahren fehlen (z. B.
in der Diagnostik lebensmittelassoziierten Viren). Einer mustergültigen Validierung
und Standardisierung molekularbiologischer Verfahren bei voller Transparenz der
eingesetzten Chemie und verwendeter Primersequenzen („public domain assays“)
stehen aber die durchgehende Patentierung und Kommerzialisierung dieser Verfah-
ren entgegen. Wollen Anwender nicht auf Fertig-Kits zurückgreifen, müssen sie
wiederum in geschultes Personal investieren, um ein molekularbiologisches Labor
zu führen, oder sie geben die entsprechende Analytik außer Haus.
Um die Bedeutung der Standardisierung in der molekularbiologischen PCR-
Analytik herauszustellen, wurden mehrere ISO-Standards zu den Grundlagen ver-
abschiedet, in denen der Qualitätssicherung im Allgemeinen breiter Raum zukommt
(Tab. 7.3 ).

Tab. 7.3 Übersicht über die relevanten internationalen Normen im Hinblick auf die molekularbio-
logische Analytik pathogener Mikroorganismen mittels Polymerase-Kettenreaktion (PCR)
Nummer der Norm Kurztitel der Norm Referenz

ISO/TS 20836 Performance testing for thermal cyclers [ 1 ]

ISO 20837 Requirements for sample preparation for qualitative

detection

[ 3 ]

ISO 20838 Requirements for amplification and detection for

qualitative methods

[ 4 ]

ISO 22118 Performance characteristics of molecular detection

methods

[ 5 ]

ISO 22119 General requirements and definitions [ 6 ]