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Je nach Fragestellung, Menge und Qualität des zu untersuchenden Materials
kann die zu analysierende Nukleinsäure direkt markiert werden, es kann cDNA oder
cRNA erzeugt werden, oder aber es wird, wie im Falle der Spurenanalytik üblich,
eine Polymerasekettenreaktion (PCR) vorgeschaltet.
Der Nachweis selbst basiert immer auf den Hybridisierungseigenschaften der
Sonden bzw. der Probennukleinsäure oder deren Kopie. Meist wird das Hybridisie-
rungsereignis direkt sichtbar gemacht. Es ist aber auch eine Veränderung der Sonde
möglich, wie dies beispielsweise beim sogenannten Minisequencing (Extension der
am Array gekoppelten Sonde um ein Nukleotid) Verwendung findet.
Proteinbasierte Nachweisverfahren
Grundsätzlich bieten die Protein-Microar-
rays die Möglichkeit, fast jede Bindung mit einem Protein zu erfassen [
20, 21
].
Die Funktionsweise der Proteinchiptechnik ist dabei vergleichbar mit einem ELISA
(Enzyme-linked Immunosorbent Assay) im verkleinerten Format. Ein Proteinchip
wird mit einer biologischen Probe inkubiert und die Bindung an das immobilisierte
Protein wird anschließend detektiert. Es gibt zwei wesentliche Typen der Proteinar-
rays (siehe Abb.
5.2
):
Die am häufigsten eingesetzten Proteine sind Antikörper, entsprechend bedruck-
te Chips werden als Antikörper-Microarrays bezeichnet.
Antikörper-Microarrays
sind einfacher zu etablieren bzw. herzustellen, da die biochemischen Eigenschaften
verschiedener Antikörper immer ähnlich sind. Im Microarray liegen gegen unter-
schiedliche Antigene gerichtete Antikörper in Rasterform an den Chip gebunden
vor. Bei der Analyse wird zunächst eine zu untersuchende Lösung mit dem Micro-
array inkubiert. Antigene, die sich in der Lösung befinden, werden spezifisch vom
jeweiligen Antikörper gebunden. In einem zweiten Schritt wird mit einem löslichen
Antikörper, der einen Marker trägt (z. B. ein Fluorochrom), inkubiert. Dieser bin-
Abb. 5.2
Nachweisreaktion auf einem Antikörper- bzw. Antigen-Array mittels Fluoreszenz:
Gezeigt ist beispielhaft jeweils ein Spot eines Arrays
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