Praktischer Teil - Protein-Microarrays fur die Wirkstoffentwicklung - page 47

Geldanamycin ist als Inhibitor für Hsp90α bekannt, doch ist er auf Grund
seiner geringen Löslichkeit, hohen Hepatotoxizität und seiner limitierten
Bioverfügbarkeit für klinische Studien irrelevant, sodass nach Alternativen ge-
sucht werden muss. Die hier in der Arbeit benutzten Inhibitoren unterscheiden
sich von Geldanamycin in dem Chinonring. Er wurde zum Benzolring umge-
wandelt und besitzt Halogengruppen, Methoxygruppen oder Hydroxygrup-
pen. Es soll die Wasserlöslichkeit und die Bindungsaffinität zur ATP-Binde-
tasche verbessert werden.
Um die IC 50 -Werte der Inhibitoren untersuchen zu können, wurden die po-
tentiellen Inhibitoren in unterschiedlichen Konzentrationen (50 μM, 5 μM,
0,5 μM, 50 nM, 5 nM, 0,5 nM, 50 pM) sowie eine Negativkontrolle (FPI-
Puffer + 100 nM Cy3-ATP) und eine Positivkontrolle (FPI-Puffer) aufgetra-
gen. Nach dem Scannen der Chips erfolgte die Bewertung der Verdrängung
über den IC 50 -Wert. Um die Qualität des Arrays zu überprüfen wurde eine
dimensionslose Kennzahl, der Z-Faktor nach Z HANG ET AL . (1999) eingeführt:

ܼǦܨܽ݇ݐ݋ݎൌͳെ ଷή ˃ ౦ ିଷή ˃ ౤
μ ౦ ି μ ౤

(3)

˃ p ist die Standardabweichung und μ p der Mittelwert der Positivkontrolle, hier
der FPI-Puffer, ˃ n die Standardabweichung und μ n der Mittelwert der Nega-
tivkontrolle, hier 100 nM Cy3-ATP in FPI-Puffer.
Der Z-Faktor kann Werte zwischen ∞ < Z < 1 annehmen. Die Qualität
des Assays ist ideal mit dem Wert 1, zwischen 0,5 und 1 exzellent und zwi-
schen 0 und 0,5 grenzwertig. Negative Werte besagen, dass es zu viele Über-
schneidungen zwischen Positiv- und Negativkontrolle gibt und der Assay so-
mit nicht auswertbar ist.
Die graphische Darstellung der einzelnen Inhibitoren für beide Proteine
wird in der Abbildung 21 auf den folgenden Seiten festgehalten.