Praktischer Teil - Protein-Microarrays fur die Wirkstoffentwicklung - page 40

3.2 Direkt-kompetitiver Verdrängungsassay im

Protein-Microarray Format

Im zweiten Teil der Arbeit sollte ein direkt-kompetitiver Verdrängungsassay
im Protein-Microarray Format für das HtpG aus H. pylori entwickelt werden.
Er sollte auf der Patentschrift „Microarray-Vorrichtug für das Screenen oder
Auffinden von HSP90 Inhibitoren und von Inhibitoren weiterer krankheitsre-
levanter Zielstrukturen“ der Sartorius Stedim Biotech GmbH, Göttingen, DE
vom 11.10.2012 basieren. Dieser Assay wurde unter anderem am Institut für
Technische Chemie, Leibniz Universität Hannover entwickelt. Zuerst soll
überprüft werden, ob Cy3-markiertes ATP (s. Abb. 17) an der N-terminalen
ATP-Bindestelle von Hsp90α bzw. HtpG binden kann und ob es sich durch
Strukturanaloga von Geldanamycin als Inhibitoren verdrängen lässt.

Abbildung 17: Keilstrickformel von ʳ-(6-Aminohexyl)-ATP-Cy3 (NU-833-Cy3, Jena
Bioscience GmBH, Jena, DE).

Das humane Hsp90α und das bakterielle HtpG sollen auf einen mit Nit-
rozellulosemembran beschichteten 16-Pad-Chip (Nexterion ® NC-N16, Schott
AG, Mainz, DE) immobilisiert werden und über die Abnahme der Fluoreszenz
von Cy3-ATP soll die Verdrängung durch unmarkierte Strukturanalogen na-